新加糖肾康对高糖环境下人肾小管上皮细胞α—平滑肌肌动蛋白和E—钙黏蛋白的影响
朱苗蕊 权卓 杨丽霞 程涛 张定华 高汉媛 孙文
摘要：目的 观察新加糖肾康对高糖环境培养下人肾小管上皮细胞（HK-2）α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）的影响，探讨其防治糖尿病肾间质纤维化的作用机制。方法 含10%胎牛血清1640培养基体外培养HK-2细胞。实验分为空白对照组、高糖组、空白血清组和新加糖肾康低、中、高剂量组。药物干预后，MTT法检测细胞增殖，ELISA检测α-SMA和E-cadherin的含量。结果 与空白对照组比较，HK-2细胞经高糖培养后细胞数量和α-SMA含量显著增加、E-cadherin含量明显降低（P<0.05）；与高糖组比较，新加糖肾康组α-SMA含量降低、E-cadherin含量增加、细胞增殖受到抑制。结论 新加糖肾康能够抑制肾小管上皮细胞表型转化及细胞增殖，具有防治糖尿病肾间质纤维化的作用。
关键词：新加糖肾康；高糖；人肾小管上皮细胞；表型转化；细胞增殖
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.03.015
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）03-0054-04
Abstract： Objective To observe he effects of new Tangshenkang on α-SMA and E-cadherin of human renal tubular epithelial cell HK-2 in high concentrations of glucose； To explore the mechanism of new Tangshenkang on the prevention and treatment of diabetic renal fibrosis. Methods The HK-2 cells were cultured and divided into control group， high glucose group， animal serum control group， new Tangshenkang low-， medium-， and high-dosage group. After medicine intervention， cell proliferation was tested by MTT assay， and contents of α-SMA and E-cadherin were observed by ELISA assay. Results Compared with control group， α-SMA of HK-2 cultured with high glucose was much notable， but the content of E-cadherin significantly decreased， with statistical significance （P<0.05）. The content of α-SMA of HK-2 cultured with new Tangshenkang decreased， and the content of E-cadherin increased； cell proliferation was markedly inhibited in culture medium supernatant of HK-2 cells cultured with high glucose plus new Tangshenkang compared with only high glucose， with statistical significance. Conclusion New Tangshenkang can inhibit cell proliferation and epithelial-myofibroblast transdifferentiation of HK-2 cell induced by high glucose， and prevent the development of diabetic renal fibrosis to a certain extent.
Key words： new Tangshenkang； high glucose； human renal tubular epithelial cell HK-2； epithelial-myofibroblast transdifferentiation； cell proliferation
糖尿病肾病（DN）是糖尿病常见的慢性微血管并发症之一，其发病率高、危害大，在糖尿病所有并发症中占主要地位。但其发病机制尚未完全阐明。既往研究认为，早期DN病变在肾小球部位，而近年来研究发现，肾小管上皮细胞表型转化引起的肾间质纤维化与其关系更为密切[1]。中药复方新加糖肾康是在甘肃省中医院刘国安和张定华研究的基础上，结合北京中医药大学刘铜华教授治疗DN的学术思想，经组方优化，最终确立的临床经验方，具有益气养阴、清热祛湿、活血化瘀的功效。本课题组前期研究发现，新加糖肾康能够减少高糖环境培养下人肾小管上皮细胞细胞外基质成分Ⅰ型胶原（ColⅠ）、Ⅲ型胶原（Col Ⅲ）和纤连蛋白（FN）的分泌与沉积，并能调控纤维化因子基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及其抑制剂-1（TIMP-1）的分泌与释放[2-3]。本实验在此基础上，观察其对高糖环境下培养人肾小管上皮细胞标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）的影响，进一步探讨其对DN肾间质纤维化的作用机制。
1 实验材料
1.1 动物与细胞株
SPF级雄性Wistar大鼠20只，甘肃中医药大学动物中心，许可证号SCXK（甘）2004-0006，饲养于甘肃省中医药研究院中药研究所动物室。人肾小管上皮细胞（HK-2），上海斯信生物科技有限公司，甘肃省中医药研究院中心实验室细胞培养室培养。
摘要：目的 观察新加糖肾康对高糖环境培养下人肾小管上皮细胞（HK-2）α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）的影响，探讨其防治糖尿病肾间质纤维化的作用机制。方法 含10%胎牛血清1640培养基体外培养HK-2细胞。实验分为空白对照组、高糖组、空白血清组和新加糖肾康低、中、高剂量组。药物干预后，MTT法检测细胞增殖，ELISA检测α-SMA和E-cadherin的含量。结果 与空白对照组比较，HK-2细胞经高糖培养后细胞数量和α-SMA含量显著增加、E-cadherin含量明显降低（P<0.05）；与高糖组比较，新加糖肾康组α-SMA含量降低、E-cadherin含量增加、细胞增殖受到抑制。结论 新加糖肾康能够抑制肾小管上皮细胞表型转化及细胞增殖，具有防治糖尿病肾间质纤维化的作用。
关键词：新加糖肾康；高糖；人肾小管上皮细胞；表型转化；细胞增殖
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.03.015
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）03-0054-04
Abstract： Objective To observe he effects of new Tangshenkang on α-SMA and E-cadherin of human renal tubular epithelial cell HK-2 in high concentrations of glucose； To explore the mechanism of new Tangshenkang on the prevention and treatment of diabetic renal fibrosis. Methods The HK-2 cells were cultured and divided into control group， high glucose group， animal serum control group， new Tangshenkang low-， medium-， and high-dosage group. After medicine intervention， cell proliferation was tested by MTT assay， and contents of α-SMA and E-cadherin were observed by ELISA assay. Results Compared with control group， α-SMA of HK-2 cultured with high glucose was much notable， but the content of E-cadherin significantly decreased， with statistical significance （P<0.05）. The content of α-SMA of HK-2 cultured with new Tangshenkang decreased， and the content of E-cadherin increased； cell proliferation was markedly inhibited in culture medium supernatant of HK-2 cells cultured with high glucose plus new Tangshenkang compared with only high glucose， with statistical significance. Conclusion New Tangshenkang can inhibit cell proliferation and epithelial-myofibroblast transdifferentiation of HK-2 cell induced by high glucose， and prevent the development of diabetic renal fibrosis to a certain extent.
Key words： new Tangshenkang； high glucose； human renal tubular epithelial cell HK-2； epithelial-myofibroblast transdifferentiation； cell proliferation
糖尿病肾病（DN）是糖尿病常见的慢性微血管并发症之一，其发病率高、危害大，在糖尿病所有并发症中占主要地位。但其发病机制尚未完全阐明。既往研究认为，早期DN病变在肾小球部位，而近年来研究发现，肾小管上皮细胞表型转化引起的肾间质纤维化与其关系更为密切[1]。中药复方新加糖肾康是在甘肃省中医院刘国安和张定华研究的基础上，结合北京中医药大学刘铜华教授治疗DN的学术思想，经组方优化，最终确立的临床经验方，具有益气养阴、清热祛湿、活血化瘀的功效。本课题组前期研究发现，新加糖肾康能够减少高糖环境培养下人肾小管上皮细胞细胞外基质成分Ⅰ型胶原（ColⅠ）、Ⅲ型胶原（Col Ⅲ）和纤连蛋白（FN）的分泌与沉积，并能调控纤维化因子基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及其抑制剂-1（TIMP-1）的分泌与释放[2-3]。本实验在此基础上，观察其对高糖环境下培养人肾小管上皮细胞标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）的影响，进一步探讨其对DN肾间质纤维化的作用机制。
1 实验材料
1.1 动物与细胞株
SPF级雄性Wistar大鼠20只，甘肃中医药大学动物中心，许可证号SCXK（甘）2004-0006，饲养于甘肃省中医药研究院中药研究所动物室。人肾小管上皮细胞（HK-2），上海斯信生物科技有限公司，甘肃省中医药研究院中心实验室细胞培养室培养。
