头穴透刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP、cGMP含量的影响
吴绪平 周 爽等
吴绪平周爽刘又香王亚文黄蓉孙国杰
(湖北中医学院,武汉*"430061)
摘要为探讨头穴透刺治疗急性脑栓塞对血浆中cAMP、cGMP含量的影响,用线栓法直接阻断大鼠大脑中动脉开口处制作急性脑梗塞动物模型,应用放免技术,检测头穴透刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP、cGMP含量的影响。结果:头穴透刺后,血浆中过度降低的cAMP含量明显升高,过度升高的cGMP含量逐渐下降,病理性减小的cAMP/cGMP比值增大,并均趋于正常值水平。提示头穴透刺可以调节急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP、cGMP的含量及二者的比值。
主题词脑梗塞/针灸疗法cAMP/血液cGMP/血液头针透针
头针治疗脑源性疾病效果显著,尤其是对急性脑梗塞的治疗受到越来越广泛的关注。为了进一步探讨其作用机制,本工作动态观测了头穴透刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP、cGMP含量的影响。
1材料与方法
1.1实验动物与分组
选健康SD大鼠(250～280 g)90只,雌雄各半(同济医科大学实验动物中心提供,采用笼养方式)。随机分为正常对照组(10只)、模型组(40只)、治疗组(40只)。模型组和治疗组再按不同时相随机分为4个小组,即6 h、24 h、48 h、72 h,每小组10只。各组饲养方法与实验室环境等条件均相同,正常组无须作任何处理,直接取全血样本,模型组造模后不予针刺,按不同时相采血,治疗组造模后行头穴透刺,也按不同时相采血。
1.2动物模型的制作
将大鼠经腹腔注射6%水合氯醛(0.6 ml/100 g)后仰卧于恒温手术台上,切开右侧颈部皮肤,分离、结扎右侧颈总动脉、颈外动脉及其分支,分离右侧颈内动脉(ICA),近端备线,远端放置动脉夹。于颈总动脉上距分叉0.5 cm处切口,插入1.5号尼龙线(头端烤化呈光滑球形,直径达0.25 mm左右,并具有一定的弹性和硬度)18～20 mm。栓线进入ICA,穿过大脑中动脉(MCA)起始端至大脑前动脉近端,阻断MCA的所有血液来源。扎紧备线,剪去多余线头,缝合皮肤。在手术结束麻醉醒后,观察其神经症状,按照Kuluz神经缺损三级评分标准[1],选择符合二级者,即行走时身体向偏瘫侧转圈者作为实验观察对象。
1.3头穴透刺方法
按照中国针灸学会实验针灸研究会1992年制定的《实验动物穴位定位标准》,取"百会"透"前顶",沿皮刺入6 mm,病灶侧"率谷"透"悬厘",沿皮刺入6 mm,接通上海产G-6805治疗仪,选用疏密波,强度为1 mA左右(以大鼠肢体震颤为度),频率为30 Hz,每次通电30 min。造模麻醉清醒后即刻针刺1次,此后每日1次(即6 h组针刺1次,24 h组针刺2次,48 h组针刺3次,72 h组针刺4次)。
1.4样品制备
用心脏穿刺采血法抽取全血1.5 ml加入预置有50 μl EDTA·2 Na抗凝剂的试管内,摇匀后置冰浴中,1 h内离心(2000 r/min,10 mins)。取上清液0.1 ml移入试管,加入无水酒精2 ml,振摇1 mins,静置5 mins后离心(3000 r/min,10 mins),取上清液移入干净的青霉素小瓶内,剩余残渣加75%酒精1 ml,振摇均匀以打碎块状物后再离心(3000 r/min,10 mins),合并上清液于青霉素小瓶,烘干后置于4 ℃恒温箱中保存待测。
1.5样品测定
测定用放免药盒由上海中医药大学同位素室提供,采用上海核福光电仪器有限公司生产的SN-682型放射免疫γ计数器检测。全部程序按药盒说明书进行。
2结果
本实验所得数据,全部输入电子计算机进行统计学分析,采用组间配对玹检验方法进行显著性检验。所得结果如下。
2.1头穴透刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP含量的影响(见表1)
由表1可见,模型组血浆中cAMP含量明显低于正常组(6 h、24 h组,P<0.01),随着时间的推移,其含量有小幅度的回升,但仍具有显著性差异(48 h、72 h组,P<0.05);头穴透刺治疗后,血浆中cAMP含量逐渐上升,并于72 h基本恢复正常,与模型组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。提示头穴透刺可以明显提高急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP含量。
2.2头穴透刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cGMP含量的影响(见表2)
由表2可见,模型组血浆中cGMP含量明显高于正常组,差异具有非常显著性意义(〖WTBX〗P<0.01),头穴透刺治疗后,血浆中cGMP的含量逐渐下降,并渐趋于正常值水平,与模型组比较(48 h组P<0.05,72 h组P<0.01)差异具有显著或非常显著性意义。提示头穴透刺可以明显降低血浆中cGMP含量。
2.3头穴透刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP/cGMP的影响(见表3)
由表3可见,模型组血浆中cAMP/cGMP比值明显低于正常组,各时相组比较,差异均具有非常显著性意义(P<0.01),头穴透刺治疗后,血浆中cAMP/cGMP比值回升,并渐趋于正常值。48 h和72 h组与模型组比较,差异具有非常显著性意义(P<0.01)。提示头穴透刺可以明显提高血浆中cAMP/cGMP比值。
3讨论
3.1依据现代医学大脑皮层功能区在头皮的投影,百会透前顶为皮质运动、感觉区上部的投影区,率谷透曲鬓为面、手、上肢运动、感觉皮层区,主侧半球的语言皮质区和颞叶部分的投影。同时百会透前顶位于大脑前动脉主干投影区,率谷透曲鬓位于大脑中动脉皮层支主干和分支颞前、中、后动脉支配区的投影处。刺激上述两组头穴可以改善大脑中动脉、大脑前动脉的血液循环,使相应皮层功能区血流量发生变化,从而改善了梗塞区的血液供应,加速了脑组织的修复,促进了临床神经功能缺损症状的改善。
3.2国内外研究表明,cAMP与cGMP对血管平滑肌功能有调节作用。主要表现为影响细胞膜成分的结构和功能,降低细胞内Ca2+浓度,以及抑制肌醇磷脂代谢,抑制细胞内以Ca2+的动员,从而介导血管平滑肌的松弛反应[2]。本实验结果显示急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP含量明显下降,cGMP含量明显升高,cAMP/cGMP比值减小。这可能是由于脑梗塞引起机体神经-内分泌系统的改变,进而影响了腺苷酸环化酶和鸟苷酸环化酶的活性而造成的。头穴透刺治疗后,cAMP含量逐渐回升,cGMP含量逐渐下降,两者的比值逐渐增大,并均趋于正常值水平。因此,我们认为头穴透刺可能通过对机体血浆中cAMP、cGMP的含量及二者的比值的调节来实现对急性脑梗塞的治疗作用,但其机制有待进一步研究。
4参考文献
1Kukuz JW,Prado RJ,Dietrich D,et al.the Effect of Nitric Oxide Synthase Inhibition on Infarct Volume after Reversible Focal Ischemia in Conscious Rats.Stroke 1993;24:2023
2Axelsson KL,et al.The Clinic Value of Measurement of the Symphysis-fundus-distance and Ultrasosic Measurement of the Biparietal Diameter in Diagnosis of Intrauterine Growth Retaralation.Acta Pharmacol Toxicol 1985;57:227
(收稿日期:1999-12-17,齐淑兰发稿)
吴绪平周爽刘又香王亚文黄蓉孙国杰
(湖北中医学院,武汉*"430061)
摘要为探讨头穴透刺治疗急性脑栓塞对血浆中cAMP、cGMP含量的影响,用线栓法直接阻断大鼠大脑中动脉开口处制作急性脑梗塞动物模型,应用放免技术,检测头穴透刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP、cGMP含量的影响。结果:头穴透刺后,血浆中过度降低的cAMP含量明显升高,过度升高的cGMP含量逐渐下降,病理性减小的cAMP/cGMP比值增大,并均趋于正常值水平。提示头穴透刺可以调节急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP、cGMP的含量及二者的比值。
主题词脑梗塞/针灸疗法cAMP/血液cGMP/血液头针透针
头针治疗脑源性疾病效果显著,尤其是对急性脑梗塞的治疗受到越来越广泛的关注。为了进一步探讨其作用机制,本工作动态观测了头穴透刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP、cGMP含量的影响。
1材料与方法
1.1实验动物与分组
选健康SD大鼠(250～280 g)90只,雌雄各半(同济医科大学实验动物中心提供,采用笼养方式)。随机分为正常对照组(10只)、模型组(40只)、治疗组(40只)。模型组和治疗组再按不同时相随机分为4个小组,即6 h、24 h、48 h、72 h,每小组10只。各组饲养方法与实验室环境等条件均相同,正常组无须作任何处理,直接取全血样本,模型组造模后不予针刺,按不同时相采血,治疗组造模后行头穴透刺,也按不同时相采血。
1.2动物模型的制作
将大鼠经腹腔注射6%水合氯醛(0.6 ml/100 g)后仰卧于恒温手术台上,切开右侧颈部皮肤,分离、结扎右侧颈总动脉、颈外动脉及其分支,分离右侧颈内动脉(ICA),近端备线,远端放置动脉夹。于颈总动脉上距分叉0.5 cm处切口,插入1.5号尼龙线(头端烤化呈光滑球形,直径达0.25 mm左右,并具有一定的弹性和硬度)18～20 mm。栓线进入ICA,穿过大脑中动脉(MCA)起始端至大脑前动脉近端,阻断MCA的所有血液来源。扎紧备线,剪去多余线头,缝合皮肤。在手术结束麻醉醒后,观察其神经症状,按照Kuluz神经缺损三级评分标准[1],选择符合二级者,即行走时身体向偏瘫侧转圈者作为实验观察对象。
1.3头穴透刺方法
按照中国针灸学会实验针灸研究会1992年制定的《实验动物穴位定位标准》,取"百会"透"前顶",沿皮刺入6 mm,病灶侧"率谷"透"悬厘",沿皮刺入6 mm,接通上海产G-6805治疗仪,选用疏密波,强度为1 mA左右(以大鼠肢体震颤为度),频率为30 Hz,每次通电30 min。造模麻醉清醒后即刻针刺1次,此后每日1次(即6 h组针刺1次,24 h组针刺2次,48 h组针刺3次,72 h组针刺4次)。
1.4样品制备
用心脏穿刺采血法抽取全血1.5 ml加入预置有50 μl EDTA·2 Na抗凝剂的试管内,摇匀后置冰浴中,1 h内离心(2000 r/min,10 mins)。取上清液0.1 ml移入试管,加入无水酒精2 ml,振摇1 mins,静置5 mins后离心(3000 r/min,10 mins),取上清液移入干净的青霉素小瓶内,剩余残渣加75%酒精1 ml,振摇均匀以打碎块状物后再离心(3000 r/min,10 mins),合并上清液于青霉素小瓶,烘干后置于4 ℃恒温箱中保存待测。
1.5样品测定
测定用放免药盒由上海中医药大学同位素室提供,采用上海核福光电仪器有限公司生产的SN-682型放射免疫γ计数器检测。全部程序按药盒说明书进行。
2结果
本实验所得数据,全部输入电子计算机进行统计学分析,采用组间配对玹检验方法进行显著性检验。所得结果如下。
2.1头穴透刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP含量的影响(见表1)
由表1可见,模型组血浆中cAMP含量明显低于正常组(6 h、24 h组,P<0.01),随着时间的推移,其含量有小幅度的回升,但仍具有显著性差异(48 h、72 h组,P<0.05);头穴透刺治疗后,血浆中cAMP含量逐渐上升,并于72 h基本恢复正常,与模型组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。提示头穴透刺可以明显提高急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP含量。
2.2头穴透刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cGMP含量的影响(见表2)
由表2可见,模型组血浆中cGMP含量明显高于正常组,差异具有非常显著性意义(〖WTBX〗P<0.01),头穴透刺治疗后,血浆中cGMP的含量逐渐下降,并渐趋于正常值水平,与模型组比较(48 h组P<0.05,72 h组P<0.01)差异具有显著或非常显著性意义。提示头穴透刺可以明显降低血浆中cGMP含量。
2.3头穴透刺对急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP/cGMP的影响(见表3)
由表3可见,模型组血浆中cAMP/cGMP比值明显低于正常组,各时相组比较,差异均具有非常显著性意义(P<0.01),头穴透刺治疗后,血浆中cAMP/cGMP比值回升,并渐趋于正常值。48 h和72 h组与模型组比较,差异具有非常显著性意义(P<0.01)。提示头穴透刺可以明显提高血浆中cAMP/cGMP比值。
3讨论
3.1依据现代医学大脑皮层功能区在头皮的投影,百会透前顶为皮质运动、感觉区上部的投影区,率谷透曲鬓为面、手、上肢运动、感觉皮层区,主侧半球的语言皮质区和颞叶部分的投影。同时百会透前顶位于大脑前动脉主干投影区,率谷透曲鬓位于大脑中动脉皮层支主干和分支颞前、中、后动脉支配区的投影处。刺激上述两组头穴可以改善大脑中动脉、大脑前动脉的血液循环,使相应皮层功能区血流量发生变化,从而改善了梗塞区的血液供应,加速了脑组织的修复,促进了临床神经功能缺损症状的改善。
3.2国内外研究表明,cAMP与cGMP对血管平滑肌功能有调节作用。主要表现为影响细胞膜成分的结构和功能,降低细胞内Ca2+浓度,以及抑制肌醇磷脂代谢,抑制细胞内以Ca2+的动员,从而介导血管平滑肌的松弛反应[2]。本实验结果显示急性脑梗塞大鼠血浆中cAMP含量明显下降,cGMP含量明显升高,cAMP/cGMP比值减小。这可能是由于脑梗塞引起机体神经-内分泌系统的改变,进而影响了腺苷酸环化酶和鸟苷酸环化酶的活性而造成的。头穴透刺治疗后,cAMP含量逐渐回升,cGMP含量逐渐下降,两者的比值逐渐增大,并均趋于正常值水平。因此,我们认为头穴透刺可能通过对机体血浆中cAMP、cGMP的含量及二者的比值的调节来实现对急性脑梗塞的治疗作用,但其机制有待进一步研究。
4参考文献
1Kukuz JW,Prado RJ,Dietrich D,et al.the Effect of Nitric Oxide Synthase Inhibition on Infarct Volume after Reversible Focal Ischemia in Conscious Rats.Stroke 1993;24:2023
2Axelsson KL,et al.The Clinic Value of Measurement of the Symphysis-fundus-distance and Ultrasosic Measurement of the Biparietal Diameter in Diagnosis of Intrauterine Growth Retaralation.Acta Pharmacol Toxicol 1985;57:227
(收稿日期:1999-12-17,齐淑兰发稿)
