不同产地红枣多糖抗氧化性比较

    李霄 马向荣 温俊峰

    摘 ?????要：超声波辅助提取红枣多糖，并通过体外抗氧化体系研究来自不同产地的红枣多糖的抗氧化活性，结果表明，来自横山、绥德、米脂的红枣多糖对羟基自由基、超氧阴离子和DPPH·自由基的清除率都随着多糖浓度的升高而呈上升趋势，不同产地的红枣多糖的清除能力不同，其中来源于横山的红枣多糖对羟基自由基和DPPH自由基的最大清除率均为最好，分别达57.71%和85.09%，来自绥德的红枣多糖对超氧阴离子的最大清除率最好，达61.37%，来自米脂的红枣次之，来自绥德的红枣清除率较低。因此，红枣多糖对超氧阴离子，羟基自由基和DPPH自由基都有较好的清除效果，是具有开发前景的天然抗氧化剂。

    关 ?键 ?词：红枣多糖;抗氧化性;红枣;DPPH· 自由基

    中图分类号：TQ 041+.7 ????文献标识码： A ??????文章编号： 1671-0460（2019）02-0285-04

    Abstract： Ultrasonic assisted extraction of jujube polysaccharides was carried out， and antioxidant activities of polysaccharides in jujubes from different habitats were studied by the antioxidant system in vitro. The results showed that the scavenging rates of polysaccharides in jujubes from Hengshan， Suide and Mizhi on hydroxyl radicals， superoxide anions and DPPH free radicals increased with the increase of polysaccharide concentration. The maximum scavenging ability of polysaccharides in jujubes from different habitats was different. The maximum scavenging rates of polysaccharides in the jujube from Hengshan to hydroxyl radicals and DPPH free radicals were the best， 57.71% and 85.09%. The maximum scavenging rate of polysaccharides in the jujube from Suide to superoxide anion was the best， up to 61.37%， that from Mizhi was the next， and that from Hengshan was the lowest. Therefore， the jujube polysaccharide has good scavenging effect on superoxide anion， hydroxyl radical and DPPH free radical， and is a natural antioxidant with development prospect.

    Key words： Jujube polysaccharides; Antioxidant capacity; Jujube; DPPH·free radicals

    红枣为鼠李科枣树的果实，又名华枣、大枣。由于枣树适应能力强，根系发达，抗逆性强，可以在干旱的山地，沙地，盐碱地等不良环境中成长，因此枣树在我国分布面积广泛，产量巨大[1，2]。

    红枣是五果之一，红枣有较高的营养价值及功效，含有大量丰富的蛋白质、脂肪、糖类、粗纤维、维生素等营养成分[3]。还含有多糖、黄酮、环磷酸腺苷等活性成分[4]。其中红枣多糖是重要的生理活性物质。多糖是生物体中广泛存在的物质，是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物，它是生物体内重要的生物大分子，是维持生命活动正常运转的基本物质之一[5]。植物多糖，又称植物多聚糖，是植物细胞代谢产生的聚合度超过10个的聚糖[6]。据报道，红枣多糖具有较强的抗过敏功效，还能够增强肌力，消除疲劳，扩张血管，增加心肌收缩力，对防治心血管疾病都有良好的作用。对于降低血糖有一定效果[7]。可以清除自由基，保护细胞膜的完整性，具有抗补体活性[8-11]，促进淋巴细胞增殖，增强免疫力，作为免疫增强剂，间接的抑制肿瘤细胞[8]，因此红枣是良好的药食同源食品。

    本课题应用超声波法提取红枣多糖，比较来自不同产地的红枣多糖对羟基自由基、超氧阴离子、DPPH自由基的清除效果，对红枣多糖的体外抗氧化活性进行评价，为红枣多糖的开发价值提供理论依据，为红枣的深加工提供新的思路和方向，同时可以提高红枣附加值，增加红枣种植的收入。不同产地红枣多糖的抗氧化活性的差异为红枣种植条件和种植方式的改进也可以提供间接的依据。

    1 ?实验部分

    1.1 ?实验试剂

    无水乙醇，过氧化氢（30%），水杨酸 天津市致远化学试剂有限公司;硫酸亚铁 ?天津市恒兴化学试剂;DPPH 北京中华瑞泰科技;邻苯三酚 天津市恒兴化学试剂;试剂均为分析纯。

    1.2 ?实验设备与仪器

    SHZ-D（III）循环水式真空泵 巩义市予华仪器有限责任公司;WK-200B小型高速粉碎机 潍坊市北方制药设备;722S可见分光光度计 上海尤尼柯仪器;JM-B2003电子天平 诸登市超泽衡仪器;RE-52A旋轉蒸发器 上海亚荣生化仪器厂;KQ-300VDE超声波清洗仪器 昆山市超声波仪器;HH-1数显恒温水浴锅 丹阳门石英玻璃厂;DHG-9013A鼓风干燥箱 上海一恒科学仪器有限公司。

    1.3 ?实验方法

    原料预处理： 陕北榆林市不同产地的红枣，经手工去核，烘干粉碎，过80目标准筛，将红枣粉末装入棕色试剂瓶中备用。

    取红枣粉末于250 mL锥形瓶中，加入石油醚脱脂2～4 d，加入85%无水乙醇，料液比是1∶30 g/mL，65 ℃超声提取，溶液的PH值调节为5.5，提取功率设为300 W，超声提取90 min。提取后真空抽滤，浓缩溶液，并加入95%的乙醇溶液，放置一夜后，沉淀晰出后脱蛋白质（加三氯甲烷和正丁醇，体积比为4∶1）3次。用分液漏斗分层后，收集上层溶液真空浓缩，得红枣粗多糖，密封备用。

    1.4 ?抗氧化活性的测定

    1.4.1 ?羟基自由基清除率的测定

    参考李金凤，等人的方法[12-14]，并做相应的修改。

    配制溶液的两个基本条件是避光配制和现配现用。

    （1）水杨酸溶液的配制：分析天平称取0.124 0 g水杨酸固体粉末，无水乙醇溶解定容至100 mL容量瓶中备用;

    （2）硫酸亚铁溶液的配制：分析天平称取0.250 0 g七水合硫酸亚铁固体粉末，用二次蒸馏水溶解定容至100 mL容量瓶中备用;

    （3）1%双氧水的配制：吸取0.34 mL 30%的双氧水，二次蒸馏水定容于100 mL容量瓶中备用。

    用数显恒温水浴锅在37 ℃下反应30 min，在波长为510 nm处测定混合液的吸光度，用二次蒸馏水做参比。按照下列计算式计算红枣多糖溶液对羟基自由基的清除率。

    式中：Aa—1.00 mL水杨酸，1.00 mL七水硫酸亚铁，1.00 mL不同浓度的多糖提取液，1.00 mL双氧水;

    Ab—1.00 mL水杨酸，1.00 mL七水硫酸亚铁，1.00 mL不同浓度的多糖提取液，1.00 mL二次蒸馏水;

    Ac—1.00 mL水杨酸，1.00 mL七水硫酸亚铁，1.00 mL二次蒸馏水，1.00 mL双氧水。

    1.4.2 ?超氧阴离子清除率的测定

    参考李霄，等人的方法[15-18]，并做相应的修改。

    用吸量管吸取0.05 mol/mL的硼酸溶液2.50 mL于8支比色管中，给8号比色管中再加0.50 mL蒸馏水作对照管，给7号比色管中再加0.40 mL蒸馏水和0.10 mL邻苯三酚做自氧化管，分别给1号、2号、3号、4号、5号、6号比色管中分别加0.10 mL 0.01 mol/L邻苯三酚和0.4 mL不同浓度的红枣多糖提取液，25 ℃水浴恒温30 min，测其吸光度，根据下列公式计算红枣多糖对超氧阴离子的清除率。

    式中：A0—Tris盐酸缓冲溶液+二次蒸馏水+邻苯三酚的吸光度;

    A1—Tris盐酸缓冲溶液+红枣多糖样品+邻苯三酚的吸光度。

    1.4.3 ?DPPH·自由基清除率的测定

    DPPH·自由基的清除率测定参考王玉丽[19]等的方法。将2.00 mL浓度为（1.2×10-4 mol/L）DPPH·溶液加入到2.00 mL浓度分别为1.00，2.00，4.00，6.00，8.00，10.00 mg/mL的红枣多糖溶液中于六支比色管，室温避光放置30 min，以乙醇溶液做空白对照，在波长为517 nm测其吸光度，按照下列计算式计算样品溶液对DPPH·的清除率。

    2 ?结果与讨论

    2.1 ?不同产地红枣多糖对羟基自由基的清除能力

    如图1所示，来自不同产地的红枣多糖对羟基自由基的清除率与多糖浓度呈正相关，同一浓度不同产地红枣多糖对羟基自由基的清除率有所不同;多糖浓度在2.00～6.00 mg/mL范围内，相同浓度的红枣多糖，米脂的红枣多糖清除率较高，绥德的红枣多糖清除率较低，当红枣多糖浓度达10.00 mg/mL时，羟基自由基的清除率均达最大，其中来自横山的红枣多糖清除率最高达57.71%，绥德红枣多糖清除率次之，达55.66%，米脂红枣多糖清除率略低，为53.23%。

    2.2 ?不同产地红枣多糖对超氧阴离子的清除能力

    如图2所示，来自不同产地的红枣多糖对超氧阴离子的清除率随着多糖浓度的升高而呈上升趋势，同一浓度不同产地红枣多糖对羟基自由基的清除率各不相同;红枣多糖浓度较低时，不同产地的红枣多糖对超氧阴离子清除率相近，红枣多糖浓度在2.00～5.00 mg/mL范围内，相同浓度下，来自横山的红枣多糖清除率较高，米脂次之，绥德最低。红枣多糖浓度在5.00～10.00 mg/mL范围内，来自米脂的红枣多糖清除超氧阴离子效果最好，横山红枣次之，绥德红枣最低，当红枣多糖浓度达10.00 mg/mL时，各地红枣多糖对超氧阴离子的清除率达最大，其中绥德红枣多糖清除率最大达61.37%，米脂红枣多糖清除率次之达60.96%，横山红枣多糖清除率较低为60.03%。

    2.3 ?不同产地红枣多糖对DPPH·自由基的清除能力

    如图3所示，来自不同产地的红枣多糖对DPPH·的清除率与多糖浓度呈正相关，同一浓度不同产地红枣多糖对DPPH·的清除率各不相同;红枣多糖浓度在2.00～6.00 mg/mL范围内，来源于绥德的红枣多糖清除率较高，横山次之，米脂最低。当达到10.00 mg/mL时，各地红枣多糖对DPPH·自由基的清除率达最大，其中横山红枣多糖清除率最大达85.09%，绥德红枣多糖最大清除率次之，达84.37%，米脂红枣多糖清除率较低为84.21%。

    3 ?结 论

    通过测定不同产地红枣多糖在不同体系中的体外抗氧化活性，可知红枣多糖对自由基的清除率与红枣多糖的浓度呈正相关，在不同的浓度范围不同产地的红枣多糖对不同自由基的清除能力表现具有差异，浓度进一步增大，红枣多糖对自由基的清除率达最大值，在三个抗氧化体系中，不同产地的红枣多糖对DPPH自由基的清除率明显高于对羟基自由基和超氧阴离子的清除率[20]，且来自横山的红枣多糖对DPPH自由基的清除率最大达85.09%;对于羟基自由基的清除效果来自横山的红枣多糖表现最佳达57.71%，来自绥德的红枣次之，来自米脂的红枣多糖清除率较低。在超氧阴离子体系中，来自绥德的红枣多糖清除率最大，达61.37%，米脂红枣多糖次之，横山红枣多糖較低。总之，红枣多糖对羟基自由基﹑超氧阴离子和 DPPH·都有一定的清除效果，且不同产地红枣多糖对不同的自由基的清除能力略有差异，红枣多糖可以作为有效的天然抗氧化剂，进一步开发红枣多糖的价值，具有较好的前景。

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