电针“三阴交-悬钟”对类痛经模型大鼠血浆血栓素B2(TXB2)、六酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)的影响
辛思源 杨志新 郭建恩 林凤 李春华
摘 要:本研究观察电针对类痛经模型大鼠的镇痛效应、以及血浆血栓素B2和六酮前列腺素F1α的影响,来探讨针刺对胞宫疼痛缓解作用的机制,对“三阴交-悬钟”的特异性进行初步探讨。
关键词:电针;三阴交-悬钟;痛经;扭体反应;血栓素B2;六酮前列腺素F1α
一、材料与方法
(一)实验动物与分组
本动物实验选用48只清洁级健康雌性SD大鼠,鼠龄3个月,体重为(240±20)g,性成熟且未交配。饲养期给予普通清洁级饲料和自由饮水,室温为(20±1)℃,湿度为(45±5)%,日光灯照射。采用随机方法将大鼠分为:对照组、模型组、三阴交组、悬钟组、“三阴交-悬钟”组、非穴组,共6组,每组8只。
(二)主要仪器与实验试剂
G6805-Ⅱ型电针仪;一次性针灸针;5415R高速离心机;MDF-u50A型超低温冰箱;苯甲酸雌二醇注射液;缩宫素注射液;6-酮-前列腺素F1α放免试剂盒;血栓素B2放免试剂盒;乙二胺四乙酸及抑肤酶。
(三)实验造模
选择处在动情间期的大鼠,来制备实验性类痛经大鼠模型。模型组及各电针组要连续10d于皮下注射苯甲酸雌二醇,期间第一、第10天每只大鼠为皮下给药0.5mg,余下日为0.2mg,待第10天注射苯甲酸雌二醇1h后给予腹腔注射缩宫素0.2mL/只。对照组:每日每只大鼠皮下注射同等剂量的生理盐水,待第10天皮下注射生理盐水1h后,每只大鼠予以腹腔注射生理盐水0.2mL。
(四)实验取穴及针刺方法
实验取穴:根据大鼠的生理特点、形态以及解剖的位置,依据《实验针灸学》中穴位的定位标准,选取相对穴“三阴交-悬钟”。三阴交穴:于大鼠后肢内踝尖上10mm处;悬钟穴:于大鼠后肢外踝尖上10mm处,与三阴交穴位置相对;非穴:与三阴交、悬钟穴处于同一水平,旁开对照点,分别于两穴左侧旁开3mm处。每组皆为双侧选穴。
电针方法:三阴交、悬钟和非穴均为直刺3mm左右,相对穴“三阴交-悬钟穴”为透刺,透刺方向为三阴交透悬钟,且要于该穴位近心端约旁开2-3mm处,再行一针,浅入皮肤即可,在两针之间放置一棉球以防止发生短路,并用胶布固定。分别使两针连电针仪正极、负极,刺激频率为2/15Hz,强度为1mA,20min。在实验开始开始后的第1、3、5、7d进行实验干预,共4次。对照组与模型组以同样的方法和时间固定,不给予电针处理。
(五)大鼠扭体反应分级
扭體反应是目前公认的评价指标,将扭体行为分为0~3级。大鼠前爪平放于盒底的正常探查行为视为0级;大鼠身体斜向一边视为1级;大鼠后肢伸展、后爪背屈的同时躯体伸展、并伴有频繁盆向骨侧旋转视为2级;大鼠腹部肌肉收缩、后肢后伸视为3级。需记录实验开始20min内大鼠的扭体评分、扭体潜伏期。扭体总分为:0级×0分+1级×1分+2级×2分+3级×3分,扭体潜伏期:注射缩宫素后直至出现扭体反应的时间段。
(六)实验取材及检测方法
将大鼠断头后取血,每只大鼠取血2mL,将其血液放置于抗凝试管(30μL EDTA,40μL抑肽酶)中,经过低温离心(4℃,3500r/min),15min后,再将其血浆放置于-20℃环境中,以保存备用。血浆中TXB2及其6-keto-PGF1α的含量分别采用常规放射免疫法来测定。
(七)统计分析
本实验数据应用SPSS21.0进行分析,基础数据用均数±标准差(x±s)来表示。各组间差异采用单因素方差分析或非参数检验进行比较,以P<0.05或P<0.01作为差异有统计学意义。
二、实验结果
(一)电针对扭体的影响
与对照组相比,模型组的扭体评分值明显增高,扭体潜伏期时长明显缩短(P<0.01),证实模型大鼠已成功制备。与对照组比较,各电针组(除“三阴交-悬钟”组外)扭体评分值明显增高,扭体潜伏期时长明显缩短(P<0.01,P<0.01)。与模型组相比,各电针组的扭体评分值明显减少,扭体潜伏期时长明显延长(P<0.01,P<0.01)。
各电针组之间比较,“三阴交-悬钟”组、三阴交组的扭体评分较悬钟组、非三阴交-悬钟组明显降低(P<0.01),“三阴交-悬钟”组、三阴交组、悬钟组扭体潜伏期较非三阴交-悬钟组明显延长(P<0.05,P<0.01)。详见表1。
(二)电针对血浆TXB2、6-keto-PGF1α的含量以及二者比值的影响
和对照组相比,模型组血浆TXB2的含量、TXB2/6-keto-PGF1α的比值显著增高(P<0.01),血浆6-keto-PGF1α的含量显著降低(P<0.01);各电针组的血浆TXB2(除“三阴交-悬钟”组)、TXB2/6-keto-PGF1α的比值显著增高(P<0.01),血浆6-keto-PGF1α的含量显著降低(P<0.01)。
和模型组相比,各电针组血浆TXB2的含量、TXB2/6-keto-PGF1α的比值(除“三阴交-悬钟”组)显著降低(P<0.01),“三阴交-悬钟”组6-keto-PGF1α的含量显著增高(P<0.01),其他各电针组血浆6-keto-PGF1α的含量无明显变化(P>0.05)。
各电针组间相比较,“三阴交-悬钟”组、三阴交组、悬钟组血浆中TXB2的含量、TXB2/6-keto-PGF1α的比值较非三阴交-悬钟组显著降低(P<0.01);“三阴交-悬钟”组TXB2的含量较三阴交组显著降低(P<0.05);“三阴交-悬钟”组血浆TXB2/6-keto-PGF1α的比值较三阴交组和悬钟组显著降低(P<0.01);“三阴交-悬钟”组和三阴交组血浆中6-keto-PGF1α的含量较非三阴交-悬钟组显著增高(P<0.01),“三阴交-悬钟”组血浆6-keto-PGF1α的含量较三阴交组、悬钟组显著增高(P<0.01)。详见表2。
三、讨论
文献研究显示,痛经是针灸治疗妇产科疾病中应用最多的病种[1],且三阴交-悬钟的联合应用对于痛经具有较好的治疗效果。本实验结果提示:在痛经大鼠的血液中,其内在的血小板存在激活、释放反应的相对增强,从而可以导致血浆中TXB2升高,致使二者的比值TXB2/6-keto-PGF1α也随之失衡,以致子宫内缺血缺氧,痛经发生。
各电针组血浆中TXB2的含量、及其二者的比值TXB2/6-keto-PGF1α显著降低,可能是由于电针可以降低血浆中TXB2的含量,从而调节二者的比值以抑制血浆中血小板的聚集,使血管痉挛状态得以改善,以缓解疼痛。“三阴交-悬钟”组中TXB2的含量较三阴交组较明显著降低,可能是由于电针相对穴“三阴交-悬钟”可调节血管收缩和血管舒张,并通过血管的舒缩物质对TXB2和6-keto-PGF1α两者的平衡加以调节,使其作用效果较单纯针刺单一穴位更为明显。
有研究结果表明:相对穴“三陰交-悬钟”具有协同增效作用[2]。电针三阴交-悬钟能够较为明显的降低TXB2的含量以及TXB2/6-keto-PG F1α的比值,从而调整子宫内在的微环境,以缓解痛经。
本实验初步证实:电针相对穴“三阴交-悬钟”可调节血管舒张、收缩物质,且与其他单穴相比,相对穴具有一定的特异性,从而进一步证实经穴效应的存在,且“三阴交”“悬钟”二者在解剖位置上阴阳表里相对,“三阴交-悬钟”属相对穴。故在实验层面进一步提示“相对穴”与“经穴效应”的内在关系。
参考文献:
[1]辛思源,庞嘉,郭建恩,等.从经穴效应角度探讨相对穴三阴交-悬钟的内在关系[J].辽宁中医杂志,2017,44(12):2631-2633.
[2]赵雅芳,李春华,嵇波,等.电针三阴交、血海对痛经模型大鼠子宫微循环的影响[J].微循环学杂志,2011,(2):10-14.
基金项目:2018年4月河北省高等学校科学技术研究项目:基于三阴交-悬钟对疼痛的调控作用探讨相对穴与经穴效应的相关性(No.NQ2018082)
作者简介:辛思源(1986—),女,汉族,河北承德人,硕士,讲师,研究方向:经穴主治规律研究。
通讯作者:李春华(1982—),女,汉族,河北保定人,博士,副主任医师,研究方向:穴位效应特异性研究。