高效液相色谱法检测大脑神经递质多巴胺

    张庆云 高永光 蔡美娜 于丽伟 梁国欣 赵冠楠

    摘要：多巴胺是人脑中一种重要的神经递质，帕金森病等神经系统病变与其含量异常有密切的关系。目前常用的多巴胺检测方法有光谱法、高效液相色谱法、化学修饰电极法、传感器法、毛细管电泳法，本文就高效液相色谱法做一综述。

    关键词：高效液相色谱法；多巴胺；检测

    中图分类号：R742.5 文献标识码：A 文章编号：1006-3315（2015）07-188-001

    多巴胺（dopamine， DA）是一类儿茶酚胺类物质（CAs），它存在于神经组织及体液中，是下丘脑和脑垂体腺中的一种重要的神经递质，脑垂体内分泌功能的协调与多巴胺在脑内特定区域的分布及含量有密切关系，导致神经功能紊乱，是帕金森病（Parkinsons disease）发病的一个重要影响因素。另外，多巴胺还能够引起心脏兴奋，使血流量增加，以用于感染性休克和心源性休克。所以，进行多巴胺检测的研究具有重要的现实意义[1]。本文就多巴胺的高效液相色谱法检测作一综述。

    高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）[2，3]也是通用的DA的检测方法。近年来，由于高效液相色谱技术的不断发展，用HPLC法分离测定体液和组织中CAs的方法日趋完善，检测灵敏度可达pmol水平。高效液相色谱法具有高分离率，所以在CAs的分析中受到极大重视，HPLC法同电化学检测和荧光检测相结合是目前最有效且最常用的方法。CAs本身有自然荧光，经HPLC法分离后，可以利用它的荧光进行检测，但是由于其自然荧光相对比较弱，不能用作生物样品灵敏的选择性测定方法。儿茶酚胺类物质具有两个官能团（氨基和邻二羟基），因此可以通过衍生化形成具有强荧光的物质，借此提高检测灵敏度。吴予明等[4]利用HPLC和荧光检测器对嗜铬细胞瘤患者和正常人24h尿中DA含量进行测定，对样品进行调酸、萃取、调碱、吸附、洗涤、解析处理后，100微升进样，结果可见：多巴胺浓度在1.3*10-7mol/L～3.8*10-6mol/L内与色谱峰峰高的线性关系良好（r=0.998）精密度RSD（n=6）4.2%～10.3%。

    衍生化可分成柱前衍生化和柱后衍生化两种，在分离前需要制备荧光衍生物的柱前衍生化是，有邻苯二甲醛（OPA）、荧光胺（FA）、丹磺酞氯（DNSCI） l，2一二苯基乙二胺（DPE）及萘一2，3一二羧醛等属于柱前衍生化试剂。这些试剂可用于尿样和一些经提纯的组织样品中的儿茶酚胺类物质的测定，但对血浆中CAs的测定灵敏度较低。

    CAs与1，2一二苯基乙二胺有特异性反应，用离子交换树脂柱萃取，经过简单的提纯过程，就可以进行血浆、血红细胞和尿样中CAs的测定。Nohta等用柱前衍生化方法测定了血浆和尿样中的CAs。Ragab等用上述试剂作为HPLC法化学发光检测CAs的灵敏前置柱衍生剂，测定了CAs和异丙肾上腺素，检出限为400～120amol。目前，日本Hitachi公司已研制出基于1，2一二苯基乙二胺衍生化反应的HPLC法CAs自动分析仪，并已投放市场[5]。

    参考文献：

    [1] 张庆云，李佳林，郑培，李艳霞，车雨轩，董晓东.大脑神经递质多巴胺的检测方法 [J]医学研究与教育，2014，31（1）：87-90

    [2] Fotpoulou Maria A， Ioannou Penelope C. Post-column terbi sensitized fluorescence detection for the determination of nopinephrine， epinephrine and domamine using high-performance liq chmmatography[J].Anal Chim Acta，2002，462（2）：179～186.

    [3] 马奎蓉，权迎春，秦元满，等.手性荧光衍生化反相高效色谱法分析多巴胺[J]分析测试学报，2005，24（2）：73～75

    [4] 吴予明，等.中国卫生检验杂志，2000 ，10 （5） ：526 - 528.

    [5] 董捷，房刚，叶新强.儿茶酚胺类物质的分析进展[J]化学分析计量，2001，10（6）：34～37