山玉兰花中辛夷脂素高效液相色谱含量测定方法的建立与优化
廖汝丹+周青梅
摘要：目的建立系统、科学的山玉兰花中辛夷脂素的提取和含量测定的方法，为科学评价和有效控制山玉兰花的质量提供了可靠的方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Agilent ZORBAX C18柱（5μm，250 × 4.6 mm），流动相为甲醇 -水（60∶40），流速为 1.0 mL·min-1，检测波长为 278 nm，柱温为30℃。 结果山玉兰花中辛夷脂素的峰得到有效的分离，HPLC 检测条件、方法的专属性、线性、重复性、精密度、稳定性、回收率良好，该方法可以用于辛夷脂素的含量测定。结论该方法准确、简便、快速，适用于山玉兰花中辛夷脂素的含量分析，可为山玉兰花药材及其制剂的质量控制提供参考。
关键词：山玉兰花；辛夷脂素；高效液相色谱法
中图分类号：R284文献标志码：B文章编号：1007-2349（2018）01-0077-02
山玉兰花为木兰科植物山玉兰（Magnolia delavayi Franch）.的干燥花及花蕾，为彝族地区习用药材，微苦、涩，温。归胃、肺经。理气和胃，行气消食，止咳化痰。用于脘腹胀满，大便秘结，咳嗽痰多。目前《中国药典》尚未收载山玉兰花的含量测定方法，关于测定含量的文献报道较少，本研究拟采用高效液相色谱法，测定山玉兰花中辛夷脂素的含量，并对分析方法进行优化，为山玉兰花药材及其制剂的质量控制方法研究提供参考。
1材料
安捷伦1100 高效液相色谱仪（美国Agilent 公司 真空在线脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱、UV 检测器），赛多利斯BSA224S-CW 电子天平，赛多利斯BP211D 电子天平，KQ-500E 型超声波清洗器，YS-04A 小型高效粉碎机，Millipore 溶剂过滤系统。
辛夷脂素（由中国食品药品检定研究院提供，批号111561-201403，供含量测定用），甲醇为色谱纯，水为超纯
水，其余试剂均为分析纯。
山玉兰花药材购买于云南红河州石屏县，植物标本经中国科学院昆明植物研究所鉴定为木兰科植物山玉兰Magnolia delavayi Franch.的干燥花及花蕾。
2方法与结果
2.1高效液相色譜条件色谱柱为Agilent ZORBAX C18柱（5μm，250 × 4.6 mm），流动相为甲醇-水（60∶40），流速1.0 mL·min-1，柱温为30℃，进样量20 μL，检测波长278 nm，理论塔板数按辛夷脂素峰计算不低于 4 000，在此条件下各组分得到良好分离，液相色谱图见图 1、图2 。
2.2对照品溶液的制备精密称取辛夷脂素对照品10.00 mg，置 25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得。
2.3供试品溶液的制备取山玉兰花药材粗粉约 0.25 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加甲醇 25 mL，称重，浸泡过夜后超声提取 30 min，放置至室温，再称重，并用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，再过 0.45 μm 微孔滤膜，取续滤液即得。
2.4标准曲线的制备精密量取辛夷脂素对照品溶液（0.4 mg·mL-1）稀释成浓度为 0.02、0.04、0.08、0.16、0.32 mg·mL-1的系列对照品溶液。按上述色谱条件，分别进样，测定峰面积，以色谱峰面积 A 为纵坐标，对照品浓度 C 为横坐标，计算得辛夷脂素的线性回归方程：A=10.787 C+25.274，r=0.999 7，结果表明辛夷脂素在 20 ～320 μg·mL-1进样浓度范围内线性关系良好。
2.5精密度实验精密吸取辛夷脂素对照品溶液，分别进样 20 μL，重复进样 6 次，依据上述色谱条件进样并计算。结果表明：辛夷脂素峰面积平均值为3975.53500，RSD 为 0.12%，表明精密度良好。
2.6重复性实验精密称取山玉兰花粗粉 6 份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按样品测定方法进行测定并计算。测得辛夷脂素的平均含量为 14.32 mg/g，RSD 为0.46%，结果表明重复性良好。
2.7稳定性实验在上述色谱条件下，精密吸取同一供试品溶液6 份，在室温下分别于 0、2、4、6、8、12、24 h 进样 20 μL，测定并计算，结果测得，辛夷脂素含量的 RSD 为 0.89%，表明山玉兰花供试品溶液在 24 h 内稳定。
2.8加样回收率实验取已测定含量的山玉兰花样品 0.1 g 共 6 份，分别精密加入辛夷脂素对照品溶液（1.403 mg/mL）1 mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下测定，结果辛夷脂素的平均加样回收率为 93.75%，RSD 为1.24%，表明本实验供试品溶液制备方法具有较好的回收率结果见表1。
2.9样品含量测定按照“2.3”项下方法制备山玉兰花供试品溶液3份，分别进样 20 μL，按照上述色谱条件进行测定，以外标法计算样品中辛夷脂素的含量。结果见表 2。
3讨论
山玉兰花的化学成分复杂，而针对山玉兰花的化学成分研究未见报道，我们从该科植物的成分进行研究，该科植物主要含有木脂素、倍半萜、二萜、酚苷类化合物，经过大量实验研究确定山玉兰花中含辛夷脂素成分。本实验建立并优化了 HPLC 法测定山玉兰花中辛夷脂素的含量，其样品制备方法简单，分离效果理想，分析快速准确，专属性强，精密度高，重现性较好，因此本方法可为山玉兰花药材质量标准的制定或提高提供实验依据。[1-4]
参考文献：
[1]国家药典委员会.《中国药典》2010年版 一部 北京：中国医药科技出版社，2010：169.
[2]于宗渊，张希林，刘青，等.HPLC法测定望春花花蕾中辛夷脂素的含量[J].中药材；2005：10.
[3]曹纬国，陶燕铎，颜学伟，等.辛夷中辛夷脂素与木兰脂素高效液相色谱含量测定方法的建立与优化[J].时珍国医国药，2014，（7）：30.
[4]徐丽华，崔保国，于宗渊.RP-HPLC法测定辛夷中木兰脂素与辛夷脂素的含量[J].药物分析杂志，2003，（10）：20.
（收稿日期：2017-11-20）技术文
摘要：目的建立系统、科学的山玉兰花中辛夷脂素的提取和含量测定的方法，为科学评价和有效控制山玉兰花的质量提供了可靠的方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Agilent ZORBAX C18柱（5μm，250 × 4.6 mm），流动相为甲醇 -水（60∶40），流速为 1.0 mL·min-1，检测波长为 278 nm，柱温为30℃。 结果山玉兰花中辛夷脂素的峰得到有效的分离，HPLC 检测条件、方法的专属性、线性、重复性、精密度、稳定性、回收率良好，该方法可以用于辛夷脂素的含量测定。结论该方法准确、简便、快速，适用于山玉兰花中辛夷脂素的含量分析，可为山玉兰花药材及其制剂的质量控制提供参考。
关键词：山玉兰花；辛夷脂素；高效液相色谱法
中图分类号：R284文献标志码：B文章编号：1007-2349（2018）01-0077-02
山玉兰花为木兰科植物山玉兰（Magnolia delavayi Franch）.的干燥花及花蕾，为彝族地区习用药材，微苦、涩，温。归胃、肺经。理气和胃，行气消食，止咳化痰。用于脘腹胀满，大便秘结，咳嗽痰多。目前《中国药典》尚未收载山玉兰花的含量测定方法，关于测定含量的文献报道较少，本研究拟采用高效液相色谱法，测定山玉兰花中辛夷脂素的含量，并对分析方法进行优化，为山玉兰花药材及其制剂的质量控制方法研究提供参考。
1材料
安捷伦1100 高效液相色谱仪（美国Agilent 公司 真空在线脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱、UV 检测器），赛多利斯BSA224S-CW 电子天平，赛多利斯BP211D 电子天平，KQ-500E 型超声波清洗器，YS-04A 小型高效粉碎机，Millipore 溶剂过滤系统。
辛夷脂素（由中国食品药品检定研究院提供，批号111561-201403，供含量测定用），甲醇为色谱纯，水为超纯
水，其余试剂均为分析纯。
山玉兰花药材购买于云南红河州石屏县，植物标本经中国科学院昆明植物研究所鉴定为木兰科植物山玉兰Magnolia delavayi Franch.的干燥花及花蕾。
2方法与结果
2.1高效液相色譜条件色谱柱为Agilent ZORBAX C18柱（5μm，250 × 4.6 mm），流动相为甲醇-水（60∶40），流速1.0 mL·min-1，柱温为30℃，进样量20 μL，检测波长278 nm，理论塔板数按辛夷脂素峰计算不低于 4 000，在此条件下各组分得到良好分离，液相色谱图见图 1、图2 。
2.2对照品溶液的制备精密称取辛夷脂素对照品10.00 mg，置 25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得。
2.3供试品溶液的制备取山玉兰花药材粗粉约 0.25 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加甲醇 25 mL，称重，浸泡过夜后超声提取 30 min，放置至室温，再称重，并用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，再过 0.45 μm 微孔滤膜，取续滤液即得。
2.4标准曲线的制备精密量取辛夷脂素对照品溶液（0.4 mg·mL-1）稀释成浓度为 0.02、0.04、0.08、0.16、0.32 mg·mL-1的系列对照品溶液。按上述色谱条件，分别进样，测定峰面积，以色谱峰面积 A 为纵坐标，对照品浓度 C 为横坐标，计算得辛夷脂素的线性回归方程：A=10.787 C+25.274，r=0.999 7，结果表明辛夷脂素在 20 ～320 μg·mL-1进样浓度范围内线性关系良好。
2.5精密度实验精密吸取辛夷脂素对照品溶液，分别进样 20 μL，重复进样 6 次，依据上述色谱条件进样并计算。结果表明：辛夷脂素峰面积平均值为3975.53500，RSD 为 0.12%，表明精密度良好。
2.6重复性实验精密称取山玉兰花粗粉 6 份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按样品测定方法进行测定并计算。测得辛夷脂素的平均含量为 14.32 mg/g，RSD 为0.46%，结果表明重复性良好。
2.7稳定性实验在上述色谱条件下，精密吸取同一供试品溶液6 份，在室温下分别于 0、2、4、6、8、12、24 h 进样 20 μL，测定并计算，结果测得，辛夷脂素含量的 RSD 为 0.89%，表明山玉兰花供试品溶液在 24 h 内稳定。
2.8加样回收率实验取已测定含量的山玉兰花样品 0.1 g 共 6 份，分别精密加入辛夷脂素对照品溶液（1.403 mg/mL）1 mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下测定，结果辛夷脂素的平均加样回收率为 93.75%，RSD 为1.24%，表明本实验供试品溶液制备方法具有较好的回收率结果见表1。
2.9样品含量测定按照“2.3”项下方法制备山玉兰花供试品溶液3份，分别进样 20 μL，按照上述色谱条件进行测定，以外标法计算样品中辛夷脂素的含量。结果见表 2。
3讨论
山玉兰花的化学成分复杂，而针对山玉兰花的化学成分研究未见报道，我们从该科植物的成分进行研究，该科植物主要含有木脂素、倍半萜、二萜、酚苷类化合物，经过大量实验研究确定山玉兰花中含辛夷脂素成分。本实验建立并优化了 HPLC 法测定山玉兰花中辛夷脂素的含量，其样品制备方法简单，分离效果理想，分析快速准确，专属性强，精密度高，重现性较好，因此本方法可为山玉兰花药材质量标准的制定或提高提供实验依据。[1-4]
参考文献：
[1]国家药典委员会.《中国药典》2010年版 一部 北京：中国医药科技出版社，2010：169.
[2]于宗渊，张希林，刘青，等.HPLC法测定望春花花蕾中辛夷脂素的含量[J].中药材；2005：10.
[3]曹纬国，陶燕铎，颜学伟，等.辛夷中辛夷脂素与木兰脂素高效液相色谱含量测定方法的建立与优化[J].时珍国医国药，2014，（7）：30.
[4]徐丽华，崔保国，于宗渊.RP-HPLC法测定辛夷中木兰脂素与辛夷脂素的含量[J].药物分析杂志，2003，（10）：20.
（收稿日期：2017-11-20）技术文
